时间分辨荧光免疫技术检测乙肝两对半的临床应用价值

    我国是一个乙型肝炎高发国家。HBV标志物的早期、准确、定量检测对乙肝临床诊断、疗效观察及预防等具有重要意义。目前对乙肝的诊断主要是血清学标志物（HBV-M）如乙肝两对半、乙肝病毒核酸(HBV DNA)等的测定。检测乙肝两对半的方法多种多样,其中酶联免疫吸附试验（ELISA）以快速简便,成本低廉而在国内各医院广泛应用,但因酶的纯度和反应过程容易受环境因素影响，导致稳定性不好，随着免疫技术的不断发展,时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）是近10年发展起来的一种高灵敏度的定量检测方法，其应用范围逐渐扩大。
    TRFIA以其灵敏度高、操作简便易自动化、标准曲线范围宽、不受样品自然荧光干扰、标记物制备简便且稳定、无放射性污染、多标记等特点，越来越受到国内检验界的认可，随着TRFIA分析仪及其试剂的国产化，TRFIA法将是一种值得推广普及的好方法。

    时间分辨荧光免疫定量测定乙肝两对半的临床意义：
    ◇极大地提高了检测的灵敏度
时间分辨荧光免疫定量技术（TRFIA）检测HbsAg灵敏度可达0.2ng/ml,而酶标（EIASA）检测的灵敏度是2ng/ml，极大地提高检测的灵敏度。因此，在急性乙肝早期能及早检出HbsAg，确证HBV感染，缩短窗口期；其次，可发现低浓度HbsAg携带者；在部分慢性乙肝患者中，由于机体缺乏对HBV包膜蛋白的免疫应答，HbsAg表达较低，酶标检测可出现HbsAg和 HbsAb均阴性的情况，TRF技术则可避免这些情况的发生，为正确判断病情提供依据。

◇能动态观察疗效和监测病情
1）定量分析HBsAg和 HBsAb的浓度变化，可预见急性乙肝是否处于恢复期。如HBsAg浓度降低，HBsAb浓度逐渐升高，可说明病情正往恢复期发展；反之，HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则易发展为慢性乙肝或病毒携带者。
2）定量分析HBeAg和HBeAb的浓度变化，可反映病情变化和治疗效果。定量测定能明确检测HBeAg向HBeAb转换的时期，即表现为HBeAg浓度下降和HbeAb升高的过程。高浓度的HBeAg还可间接提示病毒处于高复制状态，具有较高的传染性。高浓度的HBeAb一方面提示病情好转，而在某些时候（如肝功能指标很差）则可能与肝坏死、肝硬化、肝癌有关。
3） HBcAb浓度的高低可反映病毒感染的状态。高浓度的抗-Hbc提示乙肝急性感染，恢复期浓度降低。慢性乙肝呈抗-Hbc持续高浓度。而低浓度的抗-Hbc一般为恢复期或既往感染。
4）有利于对慢性肝炎活动性或非活动性的判断。非活动性慢性乙肝各项指标相对稳定，活动性往往呈现进行性变化。
　　 ◇TRFIA和定量PCR技术可互相补充
血清HBV-DNA荧光定量PCR测定可以直接反映血液中病毒复制状态，具有很多临床应用价值，但不能完全反映病毒复制静息期肝细胞内HBV病毒状态。HBV-DNA阴性并不完全代表体内HBV已被清除，结合"两对半"各项指标更能客观反映体内HBV病毒状态。

　　◇HbsAb的定量测定能够对乙肝的预防起到监督作用
HbsAb的定量测定能够对抗体是否真正具有"中和"HBV的免疫力作出正确评价，对乙肝的预防起到监督作用。HbsAb的含量在10mlU/ml以上病人ELISA检测即可呈阳性结果，但并不提示机体都一定具有免疫力，而HBsAb 的含量在10-100mlU/ml之间的样本，定性虽为"阳性"，但此时机体对HBV的免疫力较弱，甚至不能预防HBV感染。只有HbsAb的含量达到100mlU/ml以上时才可确定具有抵抗HBV入侵的作用。作定量检测，可根据HBsAb 的含量判断机体对HBV的免疫状态及乙肝疫苗的免疫效果。因此定量测定对乙肝疫苗免疫力的评价和高危人群预防免疫具有重要意义，特别是在少年儿童预防乙肝方面。
结论:TRFIA是一种灵敏度高、特异性强、稳定性好的定量检测方法,具有重要的临床应用价值。